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嚴(yán)謹(jǐn)?shù)腤estern Blot實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中要求有良好的參照體系，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析是非常有用。特別是當(dāng)實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)問題時(shí)，借助參照體系很容易就可以查出問題所在。良好的參照體系通常包括分子量Marker（用來確定蛋白條帶對(duì)應(yīng)的分子量大?。?，空白載體對(duì)照（如果是誘導(dǎo)表達(dá)體系還應(yīng)該有誘導(dǎo)前的對(duì)照），已知量標(biāo)準(zhǔn)產(chǎn)物的正對(duì)照；另外還有內(nèi)參?？墒怯捎诮?jīng)費(fèi)限制或者偷懶的原因，國內(nèi)的不少人做Western Blot往往省略參照，導(dǎo)致結(jié)果出現(xiàn)問題時(shí)無法分析結(jié)果――即便有結(jié)果也可能影響結(jié)果的分析。內(nèi)參是最容易被忽略的一項(xiàng)。我們知道，要用Western Blot比較不同條件下或者不同組織中，目的蛋白表達(dá)量的相對(duì)多少，前提條件是等量的細(xì)胞上樣，才有比較的基礎(chǔ)。特別表達(dá)量不高時(shí)，上樣量誤差就很可能影響結(jié)果的分析。所以你需要內(nèi)參。 內(nèi)參即是內(nèi)部參照（Internal Control），對(duì)于哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)來說一般是指由管家基因編碼表達(dá)的蛋白(Housekeeping Proteins)，它們?cè)诟鹘M織和細(xì)胞中的表達(dá)相對(duì)恒定，在檢測蛋白的表達(dá)水平變化時(shí)常用它來做參照物。在Western Blot 實(shí)驗(yàn)中，除了需要進(jìn)行蛋白抽提、蛋白定量、等量蛋白上樣電泳、轉(zhuǎn)膜、靶蛋白抗體孵育、顯色等步驟以外，還需要進(jìn)行內(nèi)參的檢測，以校正蛋白質(zhì)定量、上樣過程中存在的實(shí)驗(yàn)誤差，保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。。

western blot為什么必須要用內(nèi)參 要檢測一個(gè)基因的表達(dá)產(chǎn)物是否正確，或者比較表達(dá)產(chǎn)物量的相對(duì)變化，首選方法是western blot。因?yàn)閣estern blot操作相對(duì)簡單方便，既可以定性分析表達(dá)產(chǎn)物，同時(shí)還可以指示目的蛋白量的相對(duì)變化。雖然，順利的時(shí)候western blot做起來很簡單，可不順的時(shí)候也很令人心煩――做不出結(jié)果啦、假陽性啦、結(jié)果出現(xiàn)多條帶啦、到底是一抗有問題還是二抗有問題啦……畢竟，作為一種有活性的生物大分子，抗體和抗原的反應(yīng)畢竟不象1+1那么明確，而用這種不確定的試劑來測定同樣知之甚少的表達(dá)產(chǎn)物，確實(shí)是有一定的不確定性的。所以，嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膚estern blot實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中要求有良好的參照體系，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析是非常有用。特別是當(dāng)實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)問題時(shí)，借助參照體系很容易就可以查出問題所在，而不必抓耳撓腮怨天尤人。良好的參照體系通常包括分子量marker（用來確定蛋白條帶對(duì)應(yīng)的分子量大?。瞻纵d體對(duì)照（如果是誘導(dǎo)表達(dá)體系還應(yīng)該有誘導(dǎo)前的對(duì)照），已知量標(biāo)準(zhǔn)產(chǎn)物的正對(duì)照；另外還有內(nèi)參?？墒怯捎诮?jīng)費(fèi)限制或者偷懶的原因，國內(nèi)的不少人做western blot往往省略參照，導(dǎo)致結(jié)果出現(xiàn)問題時(shí)無法分析結(jié)果――即便有結(jié)果也可能影響結(jié)果的分析。