- 1. 瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA
- 2. 瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)dna實(shí)驗(yàn)報(bào)告
- 3. 瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA心得體會(huì)
- 4. 瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)dna注意事項(xiàng)
- 5. 瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA實(shí)驗(yàn)報(bào)告注意事項(xiàng)
- 6. 瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)dna實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖
- 7. 瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)dna實(shí)驗(yàn)原理
- 8. 瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)dna失敗的原因
- 9. 瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)dna時(shí)點(diǎn)樣孔放哪
1. 瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA
如果DNA出現(xiàn)降解或者是混有其他雜質(zhì),例如蛋白質(zhì)、RNA的話,那么瓊脂糖凝膠就能夠檢測(cè)得到DNA的質(zhì)量。 標(biāo)準(zhǔn)主要是通過(guò)觀察電泳條帶的亮度,通過(guò)亮度就可以粗略地計(jì)算出DNA條帶的含量。如果DNA出現(xiàn)損失,對(duì)應(yīng)的條帶就會(huì)變暗或者是消失。 線性的單一DNA樣品一般是單條帶,質(zhì)粒的話可能會(huì)有2-3條帶. 如果條帶變寬、變暗、或者變成彌散的DNA條帶,表示DNA非特異的降解. 如果條帶變成多條,表示可能被酶切.如果質(zhì)粒被單酶切,可能變成一條亮帶. 如果有蛋白質(zhì)污染,上樣孔可能發(fā)亮.如果有RNA污染,可能小分子量部分會(huì)有彌散.
2. 瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)dna實(shí)驗(yàn)報(bào)告
可以,瓊脂糖凝膠電泳可以通過(guò)限制性酶切多態(tài)性(RFLP)或者擴(kuò)增片斷多態(tài)性(AFLP)來(lái)鑒定檢測(cè)的DNA。
就是不同DNA被特定的限制性?xún)?nèi)切酶切出來(lái)的片斷大小是不一樣的,在瓊脂糖凝膠電泳跑出來(lái)的條帶也不一樣,如果是相同的DNA,結(jié)果就一樣。3. 瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA心得體會(huì)
1.凝膠濃度高了容易起泡,尤其是劣質(zhì)瓊脂糖(濃度1-2%就可以)
2.如果要用高濃度的話,可以試試趁膠還熱的時(shí)候,用小藥勺之類(lèi)的東西把起泡趕到邊緣后挑起
3.剛加熱完是有小氣泡的,稍微靜置一下,等氣泡都消了,再倒進(jìn)電泳槽
4.如果靜置到有點(diǎn)凝固了還是有氣泡的話,說(shuō)明你加熱的時(shí)間不夠,沒(méi)有完全融化
4. 瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)dna注意事項(xiàng)
DNA如果降解或者混有其他雜質(zhì)比如蛋白質(zhì)、RNA的話,在電泳中可以檢測(cè)的到.線性的單一DNA樣品一般是單條帶,質(zhì)粒的話可能會(huì)有2-3條帶.如果條帶變寬、變暗、或者變成彌散的DNA條帶,表示DNA非特異的降解.‘如果條帶變成多條,表示可能被酶切.如果質(zhì)粒被單酶切,可能變成一條亮帶.如果有蛋白質(zhì)污染,上樣孔可能發(fā)亮.如果有RNA污染,可能小分子量部分會(huì)有彌散.等等.標(biāo)準(zhǔn)是電泳條帶亮度.通過(guò)亮度可以粗略計(jì)算DNA條帶的含量.如果DNA有損失,對(duì)應(yīng)的條帶會(huì)變暗或者消失
5. 瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA實(shí)驗(yàn)報(bào)告注意事項(xiàng)
DNA分子在瓊脂糖凝膠中脈沖時(shí)有電荷效應(yīng)和分子篩效應(yīng)。DNA分子在高于等電點(diǎn)的ph溶液中帶負(fù)電荷,在電場(chǎng)中向正極移動(dòng)。由于糖-磷酸骨架在結(jié)構(gòu)上的重復(fù)性質(zhì),相同數(shù)量的雙鏈DNA幾乎具有等量的凈電荷,因此它們能以同樣的速率向正極方向移動(dòng)。
6. 瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)dna實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖
RNA分子有很多二級(jí)結(jié)構(gòu),需經(jīng)變性劑處理,而DNA一般不需要變性處理 RNA電泳的電泳槽及緩沖液均需要確保無(wú)RNAase,有RNAase抑制劑處理過(guò);而DNA相應(yīng)的則需要DNAase抑制劑處理 所用的緩沖液不同 染色過(guò)程不同
7. 瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)dna實(shí)驗(yàn)原理
二、實(shí)驗(yàn)原理
瓊脂糖凝膠電泳是用于分離、鑒定和提純DNA片段的標(biāo)準(zhǔn)方法。瓊脂糖是從瓊脂中提取的一種多糖,具親水性,但不帶電荷,是一種很好的電泳支持物。DNA在堿性條件下(pH8.0的緩沖液)帶負(fù)電荷,在電場(chǎng)中通過(guò)凝膠介質(zhì)向正極移動(dòng),不同DNA分子片段由于分子和構(gòu)型不同,在電場(chǎng)中的泳動(dòng)速率液不同。溴化乙錠(EB)可嵌入DNA分子堿基對(duì)間形成熒光絡(luò)合物,經(jīng)紫外線照射后,可分出不同的區(qū)帶,達(dá)到分離、鑒定分子量,篩選重組子的目的
8. 瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)dna失敗的原因
補(bǔ)充一點(diǎn)就是看看你的片段是否有這個(gè)酶的酶切位點(diǎn)。
盡管有些好笑,但是有人確實(shí)犯過(guò)這樣的錯(cuò)誤。
你提取的質(zhì)粒濃度很低的話,在酶切的時(shí)候就少加點(diǎn)水多加點(diǎn)質(zhì)粒。
不然濃度低當(dāng)然看不見(jiàn)。
9. 瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)dna時(shí)點(diǎn)樣孔放哪
DNA分子在高于其等電點(diǎn)的pH溶液中中帶負(fù)電,因?yàn)樗f(shuō)的等電點(diǎn)是指蛋白質(zhì)或兩性電解質(zhì)所帶凈電荷為零時(shí)溶液的pH,此時(shí)蛋白質(zhì)或兩性電解質(zhì)在電場(chǎng)中的遷移率為零.當(dāng)外界溶液的pH大于兩性離子的等電點(diǎn)值,兩性離子釋放質(zhì)子帶負(fù)電;當(dāng)外界溶液的pH小于兩性離子的等電點(diǎn)值,兩性離子質(zhì)子化帶正電.