主要就是利用酵母發(fā)酵的工藝。

當(dāng)然有

沒(méi)有吧

現(xiàn)在在那呢？

怎么想起問(wèn)這樣的問(wèn)題了？最近如何？

難道你看到了什么現(xiàn)實(shí)的東西是與理論不符的，遇到假酒了？

沒(méi)有可能，您想一下，酒精是做什么的？

是真的，我就是茅臺(tái)鎮(zhèn)人，周?chē)従佑性诰茝S上班的，聽(tīng)說(shuō)龍則河醬香酒用的是陶缸存酒，放在通風(fēng)的地方，酒廠規(guī)模也大，真的是專(zhuān)業(yè)做醬香酒的，能保證口感。

醬香潭酒是產(chǎn)自瀘州古藺赤水河上游醬香名酒帶，地處四川與貴州交界，與位于貴州仁懷市的茅臺(tái)鎮(zhèn)僅一河之隔。這里空氣流動(dòng)少，雨水富足，四季如春，為釀造高品質(zhì)醬香型白酒提供了必要條件；獨(dú)特天成的自然環(huán)境形成了龐大的釀酒微生物群落，它們又對(duì)釀造高品質(zhì)醬香型白酒提供了有效幫助。

"九暹酒的神秘 1、神秘的地理環(huán)境 位于仁懷鎮(zhèn),地處云貴高原,釀造壞境海拔409-500米,四面崇山峻嶺環(huán)繞。 2、神秘的氣候 夏季炎熱,冬季溫和,少見(jiàn)霜雪,常年平均氣溫18度左右,空氣濕度較大,適宜釀酒微生物的生成與繁殖。 3、神秘的地質(zhì)結(jié)構(gòu)與土壤 土壤具有良好的滲透性,因而無(wú)論地表水和地下水都經(jīng)過(guò)層層過(guò)濾,濾出純潔,香甜可口的優(yōu)質(zhì)泉水。 4、神秘的微生物群 該微生物群落在特殊的氣候同特殊的地質(zhì)結(jié)構(gòu)下,已成為茅臺(tái)河谷醬香生產(chǎn)中不可或缺的最重要因素之一。 5、神秘的紅纓子高粱 獨(dú)特氣候條件生長(zhǎng)出來(lái)的紅高粱特別適合釀酒,是生產(chǎn)白酒獨(dú)一無(wú)二的原料。 6、神秘的赤水河谷 赤水河水質(zhì)好,硬度低,微量元素含量豐富且無(wú)污染,這種入口微甜無(wú)溶解雜質(zhì)的水蒸餾釀出的酒特別甘美。 7、神秘的原生態(tài)釀造工藝 端午踩曲,重陽(yáng)投料,高溫制曲,高溫堆積,高溫接酒,七次取酒,八次發(fā)酵,九次蒸餾。長(zhǎng)期陳釀,精心勾兌。整個(gè)過(guò)程順應(yīng)春夏秋冬的交替規(guī)律,五谷之精華和四季之靈韻,渾然合為一體,香自天成,是其它白酒完全無(wú)法做到的。 九暹（xiān）,是哥弟廣州寰九公司主推的高端幽雅型醬香白酒,九暹酒產(chǎn)自貴州茅臺(tái)鎮(zhèn),傾注了一代國(guó)酒大師李興發(fā)先生畢生心血,傳承了醬香型白酒復(fù)雜精細(xì)的釀造工藝,是醇厚甘美的醬香瓊漿,結(jié)合中西文化特點(diǎn),時(shí)尚大方,東情西韻,醬香風(fēng)格突出,是幽雅型醬香的杰出代表.吳天祥博士給予九暹酒""扣杯隔日香""的高度贊譽(yù)! "

茅臺(tái)酒不可克隆的秘密 茅臺(tái)酒是我國(guó)大曲醬香型酒的鼻祖，深受世人的喜愛(ài)，被譽(yù)為國(guó)酒、禮品酒、外交酒。它具有醬香突出、幽雅細(xì)膩、酒體醇厚豐滿、回味悠長(zhǎng)、空杯留香持久的特點(diǎn)。其優(yōu)秀品質(zhì)和獨(dú)特風(fēng)格是其他白酒無(wú)法比擬的。 【第一個(gè)秘密：獨(dú)特的地域環(huán)境】 茅臺(tái)酒因產(chǎn)于黔北赤水河畔的茅臺(tái)鎮(zhèn)而得名。由于茅臺(tái)鎮(zhèn)地處河谷，風(fēng)速小，十分有利于釀造茅臺(tái)酒微生物的棲息和繁殖。上世紀(jì)六七十年代全國(guó)有關(guān)專(zhuān)家曾用茅臺(tái)酒工藝及原料、窖泥，乃至工人、技術(shù)人員進(jìn)行異地生產(chǎn)，所出產(chǎn)品均不能達(dá)到異曲同工之妙。也充分證明了茅臺(tái)酒是與產(chǎn)地密不可分的關(guān)系和茅臺(tái)酒不可克隆，為此茅臺(tái)酒2001年成為我國(guó)白酒首個(gè)被國(guó)家納入原產(chǎn)地域保護(hù)產(chǎn)品。 【第二個(gè)秘密：特有的紅纓子高粱】 茅臺(tái)酒生產(chǎn)所用高粱為糯性高粱，當(dāng)?shù)厮追Q(chēng)紅纓子高粱。此高粱與東北及其他地區(qū)高粱不同的是，顆粒堅(jiān)實(shí)、飽滿、均勻，粒小皮厚，支鏈淀粉含量達(dá)88％以上，其截面呈玻璃質(zhì)地狀，十分有利于茅臺(tái)酒工藝的多輪次翻烤，使茅臺(tái)酒每一輪的營(yíng)養(yǎng)消耗有一合理范圍。茅臺(tái)酒用高粱皮厚，并富含2％－2.5％的單寧，通過(guò)茅臺(tái)工藝發(fā)酵使其在發(fā)酵過(guò)程中形成兒茶酸、香草醛、阿魏酸等茅臺(tái)酒香味的前體物質(zhì)，最后形成茅臺(tái)酒特殊的芳香化合物和多酚類(lèi)物質(zhì)等。這些有機(jī)物的形成與茅臺(tái)酒高粱及地域微生物群系密切相關(guān)，也是茅臺(tái)酒幽雅細(xì)膩、酒體豐滿醇厚、回味悠長(zhǎng)的重要因素，特別值得一提的是茅臺(tái)酒富含一定的多酚類(lèi)物質(zhì)，適量飲用，不傷肝，能治糖尿病、感冒等疾病。 【第三個(gè)秘密：復(fù)雜的釀造工藝】 如果說(shuō)茅臺(tái)酒具有獨(dú)特的地域和特殊的原料是自然天成之作，那么茅臺(tái)酒獨(dú)特的釀造工藝就是能工巧匠之妙。概括茅臺(tái)工藝的特點(diǎn)為三高三長(zhǎng)。 茅臺(tái)酒工藝中的三高是指茅臺(tái)酒生產(chǎn)工藝的高溫制曲、高溫堆積發(fā)酵、高溫餾酒。茅臺(tái)酒大曲在發(fā)酵過(guò)程中溫度高達(dá)63℃，比其他任何名白酒的制曲發(fā)酵溫度都高10－15℃；在整個(gè)大曲發(fā)酵過(guò)程中可優(yōu)選環(huán)境微生物種類(lèi)，最后形成以耐高溫產(chǎn)香的微生物體系，在制曲過(guò)程中首先做到了趨利避害之功效。高溫堆積發(fā)酵是中國(guó)白酒生產(chǎn)敞開(kāi)式發(fā)酵最為經(jīng)典和獨(dú)創(chuàng)之作，也是其他名白酒工藝所不具有的。高溫餾酒：蒸餾工藝本身是固液分離的技術(shù)，但茅臺(tái)酒生產(chǎn)工藝的蒸餾與其他白酒完全不同。 茅臺(tái)酒工藝中的三長(zhǎng)主要指茅臺(tái)酒基酒生產(chǎn)周期長(zhǎng)；大曲貯存時(shí)間長(zhǎng)；茅臺(tái)酒基酒酒齡長(zhǎng)。茅臺(tái)酒基酒生產(chǎn)周期長(zhǎng)達(dá)一年，須二次投料、九次蒸餾、八次發(fā)酵、七次取酒，歷經(jīng)春、夏、秋、冬一年時(shí)間。而其他名白酒只需幾個(gè)月或十多天即可。茅臺(tái)酒大曲貯存時(shí)間長(zhǎng)達(dá)6個(gè)月才能流入制曲生產(chǎn)使用，比其他白酒多存3－4個(gè)月，這對(duì)提高茅臺(tái)酒基酒質(zhì)量具有重要作用，而且大曲用量大，是其他白酒的4－5倍。茅臺(tái)酒一般需要長(zhǎng)達(dá)三年以上貯存才能勾兌，通過(guò)貯存可趨利避害，使酒體更醇香味美，加上茅臺(tái)酒高沸點(diǎn)物質(zhì)豐富，更能體現(xiàn)茅臺(tái)酒的價(jià)值，這是其他香型白酒不具有的特點(diǎn)。 茅臺(tái)酒工藝的季節(jié)性生產(chǎn)指茅臺(tái)酒生產(chǎn)工藝季節(jié)性很強(qiáng)。茅臺(tái)酒生產(chǎn)投料要求按照農(nóng)歷九月重陽(yáng)節(jié)期進(jìn)行，這完全不同于其他白酒隨時(shí)投料隨時(shí)生產(chǎn)的特點(diǎn)。采用九月重陽(yáng)投料一是按照高粱的收割季節(jié)；二是順應(yīng)茅臺(tái)當(dāng)?shù)貧夂蛱攸c(diǎn)；三是避開(kāi)高營(yíng)養(yǎng)高溫生產(chǎn)時(shí)節(jié)，便于人工控制發(fā)酵過(guò)程，培養(yǎng)有利微生物體系，選擇性利用自然微生物；四是九月重陽(yáng)是中國(guó)的老人節(jié)，象征天長(zhǎng)地久，體現(xiàn)中華民族傳統(tǒng)文化。

基于高通量測(cè)序技術(shù)下土壤微生物群落結(jié)構(gòu)的研究　　土壤微生物是土壤中乃至生態(tài)系統(tǒng)的重要組成部分,在土壤的形成與發(fā)育、有機(jī)質(zhì)分解、物質(zhì)轉(zhuǎn)化與能量傳遞、地球生物化學(xué)循環(huán)與生物修復(fù)等方面均起著重要的作用。土壤微生物對(duì)環(huán)境的作用即微生物的功能多樣性主要是通過(guò)多種多樣的代謝方式和生理功能來(lái)實(shí)現(xiàn)的,因此微生物多樣性可以被認(rèn)為是評(píng)價(jià)自然或人為干擾引起的土壤變化的重要指示因子。由于微生物對(duì)生態(tài)系統(tǒng)作用這么明顯,所以研究黃河三角洲的鹽堿地土壤的土壤微生物有非常深遠(yuǎn)的意義。近年來(lái),黃河三角洲濕地生態(tài)系統(tǒng)的脆弱性得到了許多研究者的關(guān)注。土壤微生物能夠改善濕地生態(tài)系統(tǒng)的穩(wěn)定性,其分布的地域規(guī)律性以及鹽生植被演替對(duì)其的響應(yīng)規(guī)律是近年來(lái)研究的熱點(diǎn),黃河三角洲濕地也就成為研究土壤微生物群落結(jié)構(gòu)的重要場(chǎng)所。 本研究在黃河三角洲黃河口自然保護(hù)區(qū)內(nèi),選取一條能夠代表植被原生演替過(guò)程的典型濕地植物群落帶進(jìn)行研究。由與海岸線距離遠(yuǎn)近,順序?yàn)楣獍宓亍釅A蓬群落→檉柳群落→獐茅群落→羅布麻群落→白茅群落→棉花群落。通過(guò)測(cè)定土壤中水分含量、電導(dǎo)率、活性有機(jī)質(zhì)、水溶性磷、腐殖質(zhì)、堿解氮及過(guò)氧化氫酶、脲酶,研究植被原生演替過(guò)程中0-20cm深度下土壤理化性質(zhì)的變化規(guī)律。 利用高通量測(cè)序技術(shù)對(duì)黃河三角洲濕地不同植被下土壤中微生生物進(jìn)行測(cè)序,得到了土壤微生物從在門(mén)、綱、目、科、屬上各細(xì)菌的群落組成。所有30874條序列分屬于細(xì)菌的17個(gè)門(mén),其中主要的門(mén)主要包括Proteobacteria（變形菌門(mén)）、Bacteroidetes（擬桿菌門(mén)）、Actinobacteria （放線菌門(mén)）、Planctomyctes（浮霉菌門(mén)）、Firmicutes（厚壁菌門(mén)）、Acidobacteria（酸桿菌門(mén)）、 Chloroflexi（綠彎菌門(mén)）、Verrucomicrobia（疣微菌門(mén)）,所占比例分別為44.67%、7.05%、9.2%、2.16%、2.15%、6.36%、1.70%、1.07%,其中屬于Proteobacteria、Bacteroidetes、Actinobacteria、Acidobacteria門(mén)的序列總和占全部序列的67.28%,這些微生物為優(yōu)勢(shì)菌種,其中變形菌門(mén)為主要優(yōu)勢(shì)類(lèi)群。這表明盡管取樣地點(diǎn)不同,但是處于相同生境中微生物類(lèi)群的相似性。然而,不同植被類(lèi)型階段的主要土壤微生物群落結(jié)構(gòu)也存在明顯不同。 通過(guò)研究不同演替下植被對(duì)土壤微生物群落結(jié)構(gòu)的影響,可知Proteobacteria、Actinobacteria和Acidobacteria的相對(duì)豐富度有顯著性差異,其中Proteobacteria是優(yōu)勢(shì)類(lèi)群。在重鹽脅迫下,Chloroflexi、Bacteroidetes和Acidobacteria的相對(duì)豐富度有顯著性差異。在輕鹽脅迫下,Proteobacteria、Chloroflexi、Bacteroidete和Acidobacteria的相對(duì)豐富度有顯著性差異。在耕作下,Proteobacteria和Bacteroidetes的相對(duì)豐富度較演替植被白茅有下降趨勢(shì),說(shuō)明除含鹽量外,還有其他因素會(huì)對(duì)土壤微生物的群落結(jié)構(gòu)產(chǎn)生影響。運(yùn)用計(jì)算公式計(jì)算出土壤微生物的生物多樣性指數(shù)。知光板地土壤中細(xì)菌多樣性相對(duì)最少,隨著植被的覆蓋細(xì)菌多樣性有增加趨勢(shì)。通過(guò)對(duì)理化性質(zhì)對(duì)各土壤微生物的相對(duì)豐富度及微生物多樣性指數(shù)進(jìn)行研究,得出除電導(dǎo)率外,脲酶活性和土壤腐殖質(zhì)是影響土壤微生物相對(duì)豐富度和微生物多樣性指數(shù)的主要因素。

微生物群落的種群多樣性一直是微生物生態(tài)學(xué)和環(huán)境學(xué)科研究的重點(diǎn)。近幾年來(lái)，微生物群落結(jié)構(gòu)成為研究的熱點(diǎn)。首先，群落結(jié)構(gòu)決定了生態(tài)功能的特性和強(qiáng)弱。其次，群落結(jié)構(gòu)的高穩(wěn)定性是實(shí)現(xiàn)生態(tài)功能的重要因素。再次，群落結(jié)構(gòu)變化是標(biāo)記環(huán)境變化的重要方面。因此，通過(guò)對(duì)目標(biāo)環(huán)境微生物群落的種群結(jié)構(gòu)和多樣性進(jìn)行解析并研究其動(dòng)態(tài)變化，可以為優(yōu)化群落結(jié)構(gòu)、調(diào)節(jié)群落功能和發(fā)現(xiàn)新的重要微生物功能類(lèi)群提供可靠的依據(jù)。 從年代上來(lái)看，微生物群落結(jié)構(gòu)和多樣性解析技術(shù)的發(fā)展可以分為三個(gè)階段。20世紀(jì)70年代以前主要依賴(lài)傳統(tǒng)的培養(yǎng)分離方法，依靠形態(tài)學(xué)、培養(yǎng)特征、生理生化特性的比較進(jìn)行分類(lèi)鑒定和計(jì)數(shù)，對(duì)環(huán)境微生物群落結(jié)構(gòu)及多樣性的認(rèn)識(shí)是不全面和有選擇性的，方法的分辨水平低。在70和80年代，研究人員通過(guò)對(duì)微生物化學(xué)成分的分析總結(jié)出了一些規(guī)律性的結(jié)論，從而建立了一些微生物分類(lèi)和定量的方法即生物標(biāo)記物方法，對(duì)環(huán)境微生物群落結(jié)構(gòu)及多樣性的認(rèn)識(shí)進(jìn)入到較客觀的層次上。在80和90年代，現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)以DNA為目標(biāo)物，通過(guò)rRNA基因測(cè)序技術(shù)和基因指紋圖譜等方法，比較精確地揭示了微生物種類(lèi)和遺傳的多樣性，并給出了關(guān)于群落結(jié)構(gòu)的直觀信息。 1 傳統(tǒng)培養(yǎng)分離方法 傳統(tǒng)培養(yǎng)分離方法是最早的認(rèn)識(shí)微生物群落結(jié)構(gòu)和多樣性的方法，自1880年發(fā)明以來(lái)一直到現(xiàn)在仍被廣泛使用。傳統(tǒng)培養(yǎng)分離方法是將定量樣品接種于培養(yǎng)基中，在一定的溫度下培養(yǎng)一定的時(shí)間，然后對(duì)生長(zhǎng)的菌落計(jì)數(shù)和計(jì)算含量，并通過(guò)在顯微鏡下觀察其形態(tài)構(gòu)造，結(jié)合培養(yǎng)分離過(guò)程生理生化特性的觀察鑒定種屬分類(lèi)特性。培養(yǎng)分離方法采用配比簡(jiǎn)單的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)和固定的培養(yǎng)溫度，還忽略了氣候變化和生物相互作用的影響，這種人工環(huán)境與原生境的偏差使得可培養(yǎng)的種類(lèi)大大減少(僅占環(huán)境微生物總數(shù)的0.1%～10%[1])。而且，此方法繁瑣耗時(shí)，不能用于監(jiān)測(cè)種群結(jié)構(gòu)的動(dòng)態(tài)變化。 2 群落水平生理學(xué)指紋方法(CLPP) 通常認(rèn)為微生物所含的酶與其豐度或活性是密切相關(guān)的。酶分子對(duì)于所催化的生化反應(yīng)特異性很高，不同的酶參與不同的生化反應(yīng)。如果某一微生物群落中含有特定的酶可催化利用某特定的基質(zhì)，則這種酶-底物可作為此群落的生物標(biāo)記分子之一，標(biāo)記了某種群的存在。由Garlan和Mills[2]于1991年提出的群落水平生理學(xué)指紋方法(CLPP)是通過(guò)檢測(cè)微生物樣品對(duì)底物利用模式來(lái)反映種群組成的酶活性分析方法。具體而言，CLPP分析方法就是通過(guò)檢測(cè)微生物樣品對(duì)多種不同的單一碳源基質(zhì)的利用能力，來(lái)確定那些基質(zhì)可以作為能源，從而產(chǎn)生對(duì)基質(zhì)利用的生理代謝指紋。由BIOLOG公司開(kāi)發(fā)的BIOLOG氧化還原技術(shù)，使得CLPP方法快速方便。

微生物群落的種群多樣性一直是微生物生態(tài)學(xué)和環(huán)境學(xué)科研究的重點(diǎn)。近幾年來(lái)，微生物群落結(jié)構(gòu)成為研究的熱點(diǎn)。首先，群落結(jié)構(gòu)決定了生態(tài)功能的特性和強(qiáng)弱。其次，群落結(jié)構(gòu)的高穩(wěn)定性是實(shí)現(xiàn)生態(tài)功能的重要因素。再次，群落結(jié)構(gòu)變化是標(biāo)記環(huán)境變化的重要方面。因此，通過(guò)對(duì)目標(biāo)環(huán)境微生物群落的種群結(jié)構(gòu)和多樣性進(jìn)行解析并研究其動(dòng)態(tài)變化，可以為優(yōu)化群落結(jié)構(gòu)、調(diào)節(jié)群落功能和發(fā)現(xiàn)新的重要微生物功能類(lèi)群提供可靠的依據(jù)。 從年代上來(lái)看，微生物群落結(jié)構(gòu)和多樣性解析技術(shù)的發(fā)展可以分為三個(gè)階段。20世紀(jì)70年代以前主要依賴(lài)傳統(tǒng)的培養(yǎng)分離方法，依靠形態(tài)學(xué)、培養(yǎng)特征、生理生化特性的比較進(jìn)行分類(lèi)鑒定和計(jì)數(shù)，對(duì)環(huán)境微生物群落結(jié)構(gòu)及多樣性的認(rèn)識(shí)是不全面和有選擇性的，方法的分辨水平低。在70和80年代，研究人員通過(guò)對(duì)微生物化學(xué)成分的分析總結(jié)出了一些規(guī)律性的結(jié)論，從而建立了一些微生物分類(lèi)和定量的方法即生物標(biāo)記物方法，對(duì)環(huán)境微生物群落結(jié)構(gòu)及多樣性的認(rèn)識(shí)進(jìn)入到較客觀的層次上。在80和90年代，現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)以dna為目標(biāo)物，通過(guò)rrna基因測(cè)序技術(shù)和基因指紋圖譜等方法，比較精確地揭示了微生物種類(lèi)和遺傳的多樣性，并給出了關(guān)于群落結(jié)構(gòu)的直觀信息。 1 傳統(tǒng)培養(yǎng)分離方法 傳統(tǒng)培養(yǎng)分離方法是最早的認(rèn)識(shí)微生物群落結(jié)構(gòu)和多樣性的方法，自1880年發(fā)明以來(lái)一直到現(xiàn)在仍被廣泛使用。傳統(tǒng)培養(yǎng)分離方法是將定量樣品接種于培養(yǎng)基中，在一定的溫度下培養(yǎng)一定的時(shí)間，然后對(duì)生長(zhǎng)的菌落計(jì)數(shù)和計(jì)算含量，并通過(guò)在顯微鏡下觀察其形態(tài)構(gòu)造，結(jié)合培養(yǎng)分離過(guò)程生理生化特性的觀察鑒定種屬分類(lèi)特性。培養(yǎng)分離方法采用配比簡(jiǎn)單的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)和固定的培養(yǎng)溫度，還忽略了氣候變化和生物相互作用的影響，這種人工環(huán)境與原生境的偏差使得可培養(yǎng)的種類(lèi)大大減少(僅占環(huán)境微生物總數(shù)的0.1%～10%[1])。而且，此方法繁瑣耗時(shí)，不能用于監(jiān)測(cè)種群結(jié)構(gòu)的動(dòng)態(tài)變化。 2 群落水平生理學(xué)指紋方法(clpp) 通常認(rèn)為微生物所含的酶與其豐度或活性是密切相關(guān)的。酶分子對(duì)于所催化的生化反應(yīng)特異性很高，不同的酶參與不同的生化反應(yīng)。如果某一微生物群落中含有特定的酶可催化利用某特定的基質(zhì)，則這種酶-底物可作為此群落的生物標(biāo)記分子之一，標(biāo)記了某種群的存在。由garlan和mills[2]于1991年提出的群落水平生理學(xué)指紋方法(clpp)是通過(guò)檢測(cè)微生物樣品對(duì)底物利用模式來(lái)反映種群組成的酶活性分析方法。具體而言，clpp分析方法就是通過(guò)檢測(cè)微生物樣品對(duì)多種不同的單一碳源基質(zhì)的利用能力，來(lái)確定那些基質(zhì)可以作為能源，從而產(chǎn)生對(duì)基質(zhì)利用的生理代謝指紋。由biolog公司開(kāi)發(fā)的biolog氧化還原技術(shù)，使得clpp方法快速方便。商業(yè)供應(yīng)的biolog微平板分兩種：gn和mt，二者都含有96個(gè)微井，每一128 生態(tài)環(huán)境 第14卷第1期（2005年1月） 微井平板的干膜上都含有培養(yǎng)基和氧化還原染料四唑[3]。其中，biolog的gn微平板含有95種不同碳源和一個(gè)無(wú)碳源的對(duì)照井，而mt微平板只含有培養(yǎng)基和氧化還原染料，允許自由地檢測(cè)不同的碳源基質(zhì)[3]。檢測(cè)的方法是：將處理的微生物樣品加入每一個(gè)微井中，在一定的溫度下溫育一定的時(shí)間(一般為12 h)，在溫育過(guò)程中，氧化還原染料被呼吸路徑產(chǎn)生的nadh還原，顏色變化的速率取決于呼吸速率，最終檢測(cè)一定波長(zhǎng)下的吸光率進(jìn)行能源碳的利用種類(lèi)及其利用程度的分析[4]。 biolog方法能夠有效地評(píng)價(jià)土壤和其它環(huán)境區(qū)系的微生物群落結(jié)構(gòu)[3~6]。其優(yōu)點(diǎn)是操作相對(duì)簡(jiǎn)單快速，而且少數(shù)碳源即能區(qū)別碳素利用模式的差別[5]。然而，biolog體系僅能鑒定快速生長(zhǎng)的微生物，而且，測(cè)試盤(pán)內(nèi)近中性的緩沖體系、高濃度的碳源及有生物毒性的指示劑紅四氮唑(ttc)使得測(cè)試結(jié)果的誤差進(jìn)一步增大。姚槐應(yīng)[5]的研究表明，應(yīng)根據(jù)測(cè)試對(duì)象的特點(diǎn)（例如ph，碳源利用類(lèi)型及利用能力）改進(jìn)biolog體系，并且，有必要研究更好的指示劑來(lái)取代ttc。 3 生物標(biāo)記物方法 生物標(biāo)記物(biomakers)通常是微生物細(xì)胞的生化組成成分，其總量通常與相應(yīng)生物量呈正相關(guān)。由于特定結(jié)構(gòu)的標(biāo)記物標(biāo)志著特定類(lèi)型的微生物，因此一些生物標(biāo)記物的組成模式(種類(lèi)、數(shù)量和相對(duì)比例)可作為指紋估價(jià)微生物群落結(jié)構(gòu)。由于分類(lèi)的依據(jù)是從混合微生物群落中提取的生化組成成分，潛在地包括所有的物種，因而具有一定的客觀性。并且分析簡(jiǎn)便快速，適于定性甚至半定量地檢測(cè)微生物體系的動(dòng)態(tài)變化。20世紀(jì)80年代以來(lái)常用于研究微生物群落結(jié)構(gòu)的生物標(biāo)記物方法包括：醌指紋法(quinones profiling)、脂肪酸譜圖法(plfas和wcfa-fames)。測(cè)定時(shí)，首先使用合適的提取劑提取環(huán)境微生物樣品中的這些化合物并加以純化，然后用合適的溶劑制成合適的樣品用gc或lc檢測(cè)，最后用統(tǒng)計(jì)方法對(duì)得到的生物標(biāo)記物譜圖進(jìn)行定性定量分析。 3.1 醌指紋法(quinones profiling) 呼吸醌廣泛存在于微生物的細(xì)胞膜中，是細(xì)胞膜的組成成分，在電子傳遞鏈中起重要作用[7]。醌的含量與土壤和活性污泥的生物量呈良好的線性關(guān)系的研究表明，醌含量可用作微生物量的標(biāo)記[8]。有兩類(lèi)主要的呼吸醌：泛醌(ubiquinone, uq)即輔酶q和甲基萘醌(menaquinone,mk)即維生素k[9]。醌可以按分子結(jié)構(gòu)在類(lèi)(uq和mk)的基礎(chǔ)上依據(jù)側(cè)鏈含異戊二烯單元的數(shù)目和側(cè)鏈上使雙鍵飽和的氫原子數(shù)進(jìn)一步區(qū)分。研究表明，每一種微生物都含有一種占優(yōu)勢(shì)的醌[7]，而且，不同的微生物含有不同種類(lèi)和分子結(jié)構(gòu)的醌[9]。因此，醌的多樣性可定量表征微生物的多樣性，醌譜圖（即醌指紋）的變化可表征群落結(jié)構(gòu)的變化。 用醌指紋法描述微生物群落的參數(shù)[7]有：(1)醌的類(lèi)型和不同類(lèi)型的醌的數(shù)目；(2)占優(yōu)勢(shì)的醌及其摩爾分?jǐn)?shù)含量；(3)總的泛醌和總的甲基萘醌的摩爾分?jǐn)?shù)之比；(4)醌的多樣性和均勻性；(5)醌的總量等。對(duì)兩個(gè)不同的群落，由上述分析所得數(shù)據(jù)可以計(jì)算出另一個(gè)參數(shù)____非相似性指數(shù)(d)，用于定量比較兩個(gè)群落結(jié)構(gòu)的差異。 醌指紋法具有簡(jiǎn)單快速的特點(diǎn)，近幾年來(lái)廣泛用于各種環(huán)境微生物樣品(如土壤，活性污泥和其它水生環(huán)境群落)的分析。考察了醌指紋法分析活性污泥群落的分析精度，證明此方法是一種可靠的分析方法。然而，醌指紋法也存在一定的局限性，它不能反映具體哪個(gè)屬或哪個(gè)種的變化。 3.2 脂肪酸譜圖法(plfas、wcfa-fames和其它方法) 從微生物細(xì)胞提取的脂肪類(lèi)生化組分是重要的生物量標(biāo)記物，例如，極脂(磷脂)、中性脂類(lèi)(甘油二酯)可分別作為活性和非活性生物量的標(biāo)記物[10]。更重要的是，提取脂類(lèi)的分解產(chǎn)物____具有不同分子結(jié)構(gòu)的混合的長(zhǎng)鏈脂肪酸，隱含了微生物的類(lèi)型信息，其組成模式可作為種群組成的標(biāo)記。多種脂肪酸譜圖法廣泛用于土壤、堆肥和水環(huán)境微生物群落結(jié)構(gòu)的分型和動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)[11~13]。 常用的脂肪酸譜圖法可分為兩種：磷脂脂肪酸(plfas)譜圖法和全細(xì)胞脂肪酸甲酯(wcfa-fames)譜圖法[14]。二者分析的對(duì)象實(shí)質(zhì)上都是脂肪酸甲酯，不同之處在于提取脂肪酸的來(lái)源不同。磷脂脂肪酸(plfas)譜圖法提取的脂肪酸主要來(lái)源于微生物細(xì)胞膜磷脂即來(lái)源于活細(xì)胞，全細(xì)胞脂肪酸甲酯(wcfa-fames)譜圖法提取的脂肪酸來(lái)源于環(huán)境微生物樣品中的所有可甲基化的脂類(lèi)即來(lái)源于所有的細(xì)胞（包括活細(xì)胞和死細(xì)胞）。因此，磷脂脂肪酸(plfas)譜圖法的優(yōu)點(diǎn)在于準(zhǔn)確，可靠；全細(xì)胞脂肪酸甲酯(wcfa-fames)譜圖法的優(yōu)點(diǎn)在于提取簡(jiǎn)捷，所需樣品量少。對(duì)多個(gè)環(huán)境微生物樣品分析而言，先用wcfa-fames譜圖法預(yù)先篩選再用plfas法進(jìn)行分析是提高效率的較佳選擇。 脂肪酸譜圖分析包括兩種形式：一種是脂肪酸，采用gc分析儀達(dá)到分離不同結(jié)構(gòu)的分子的目的；另一種是脂肪酸甲基化產(chǎn)物____脂肪酸甲酯，采用gc-ms分析儀進(jìn)行不同分子的分離和鑒定。